新獸藥注冊

中華人民共和國農(nóng)業(yè)部公告
第1747號

　　根據(jù)《獸藥管理條例》和《獸藥注冊辦法》規(guī)定，經(jīng)審查，批準(zhǔn)江西中成藥業(yè)集團有限公司等4家單位申報的注射用黃芩等2種獸藥產(chǎn)品為新獸藥，現(xiàn)核發(fā)《新獸藥注冊證書》，并發(fā)布產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、說明書和標(biāo)簽，自發(fā)布之日起執(zhí)行。
　　批準(zhǔn)青島澳蘭百特生物工程有限公司申請的雞新城疫、傳染性支氣管炎、禽流感（H9亞型）三聯(lián)滅活疫苗（La Sota株+M41株+L株）變更注冊，并發(fā)布修訂后的產(chǎn)品制造及檢驗試行規(guī)程、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、說明書和標(biāo)簽，自發(fā)布之日起執(zhí)行。原農(nóng)業(yè)部發(fā)布的同品種獸藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)同時廢止。

　　特此公告。

    附件：1.新獸藥注冊目錄
          2.制造及檢驗試行規(guī)程
          3.質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、說明書和標(biāo)簽

　　
 
二〇一二年三月二十六日
 
 
 
 
附件1：

新獸藥注冊目錄

http://www.moa.gov.cn/govpublic/SYJ/201204/t20120406_2596312.htm

 
 
 
附件3：
注射用黃芩等3種獸藥產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、說明書和標(biāo)簽
 
一、注射用黃芩質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、標(biāo)簽和說明書
(一) 注射用黃芩質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)
 
注射用黃芩
Zhusheyong Huangqin
 
本品為黃芩經(jīng)加工制成的供注射用的無菌粉末。
【制法】  取黃芩8000 g，加水煎煮三次，合并煎液，濃縮，用鹽酸調(diào)節(jié)pH值至2.0，80℃保溫30分鐘，靜置12小時，濾過，沉淀物加適量水?dāng)噭?，?0%氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至7.0，加入等量乙醇，攪拌使溶解，濾過，濾液用鹽酸調(diào)節(jié)pH值至2.0，在80℃保溫30分鐘，靜置12小時，濾過，沉淀用乙醇洗至pH4.0，加適量水?dāng)噭颍?0%氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至6.0，加入0.5%活性炭，加熱微沸15分鐘，冷卻，濾過，噴霧干燥，收粉，制成無菌粉末500 g，分裝，即得。
【性狀】  本品為淡黃色至棕黃色的粉末，味淡，微苦。
【鑒別】  取本品10 mg，加甲醇10 ml使溶解，作為供試品溶液。另取黃芩苷對照品，加甲醇制成每1 ml含1 mg 的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法（附錄 32頁）試驗，吸取上述兩種溶液各 2 μl，分別點于同一聚酰胺薄膜上，以醋酸為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（365 nm）下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。
【檢查】 pH值  取本品，加水制成每1 ml含25 mg的溶液，照pH 值測定法（附錄49頁）測定，應(yīng)為5.0～7.0。
水分  不得過5.0%（附錄60頁第三法）。
蛋白質(zhì)  取本品0.5 g，加水10 ml使溶解，取1 ml，置試管中，滴加鞣酸試液 1~3滴，應(yīng)不得產(chǎn)生渾濁。
鞣質(zhì)  取本品0.5 g，加水10 ml使溶解，取1 ml，依法測定（附錄73頁），應(yīng)符合規(guī)定。
樹脂  取本品0.5 g，加水10 ml使溶解，取5 ml，置分液漏斗中，加三氯甲烷10ml振搖提取，分取三氯甲烷液，依法測定（附錄73頁），應(yīng)符合規(guī)定。
異常毒性 取本品1支，加10 ml氯化鈉注射液使溶解，按腹腔注射法給藥，照異常毒性檢查法（附錄118頁）檢查，應(yīng)符合規(guī)定。
過敏反應(yīng) 取本品1支，加10 ml氯化鈉注射液使溶解，照過敏反應(yīng)檢查法（附錄118頁）檢查，應(yīng)符合規(guī)定。
其他  應(yīng)符合注射劑項下有關(guān)的各項規(guī)定（附錄12頁）。
【含量測定】 照高效液相色譜法（附錄35頁）測定。
色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗  用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇－水－磷酸（50 : 50 : 0.3）為流動相；檢測波長276  nm。理論板數(shù)按黃芩苷峰計算應(yīng)不低于1000。
對照品溶液的制備  精密稱取黃芩苷對照品，加甲醇制成每1 ml含20 μg的溶液，作為對照品溶液。
供試品溶液的制備  取本品約40 mg，精密稱定，置100 ml量瓶中，加甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻。精密量取2 ml，置25 ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。
測定法  分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10 μl，注入液相色譜儀，測定，即得。
本品每支含黃芩以黃芩苷(C₂₁H₁₈O₁₁)計，不得少于375.0 mg。
【功能】 清熱燥濕，瀉火解毒。
【主治】 咳喘證，用于緩解雞傳染性支氣管炎引起的呼吸道癥狀。
【用法與用量】 肌內(nèi)注射：一次量，雞，10~20 mg，一日2次，連用3日。臨用前以10 ml注射用水充分溶解。
【規(guī)格】 每支裝0.5 g。
【貯藏】 密封，置陰涼干燥處。
【有效期】 2年
 
（二）注射用黃芩標(biāo)簽
 
獸  用
【獸藥名稱】
通用名：注射用黃芩
商品名：
漢語拼音：Zhusheyong Huangqin
【性狀】  本品為淡黃色至棕黃色的粉末，味淡，微苦。
【功能與主治】  清熱燥濕，瀉火解毒。主治咳喘證，用于緩解雞傳染性支氣管炎引起的呼吸道癥狀。
【用法與用量】  肌內(nèi)注射：一次量，雞，10~20 mg，一日2次，連用3日。臨用前以10 ml注射用水充分溶解。
【規(guī)格】  每支裝0.5 g。
【包裝】 
【貯藏】  密封，置陰涼干燥處。
【有效期】  2年。
【生產(chǎn)企業(yè)】  
 
（三）注射用黃芩說明書
 
獸  用
【獸藥名稱】
通用名： 注射用黃芩
商品名：
漢語拼音：Zhusheyong Huangqin
【主要成分】  黃芩。
【性狀】  本品為淡黃色至棕黃色的粉末，味淡，微苦。
【功能與主治】  清熱燥濕，瀉火解毒。主治咳喘證，用于緩解雞傳染性支氣管炎引起的呼吸道癥狀。
【用法與用量】  肌內(nèi)注射：一次量，雞，10~20 mg，一日2次，連用3日。臨用前以10 ml注射用水充分溶解。
【不良反應(yīng)】  尚未見不良反應(yīng)。
【規(guī)格】  每支裝0.5 g。
【包裝】 
【貯藏】  密封，置陰涼干燥處。
【有效期】 2年。
【生產(chǎn)企業(yè)】
 
二、苦參蒼術(shù)口服液質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、標(biāo)簽和說明書
(一) 苦參蒼術(shù)口服液質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)
 
苦參蒼術(shù)口服液
Kushen Cangzhu Koufuye
 
【處方】 蒼術(shù)1160 g         苦參2500 g
【制法】 以上2味，蒼術(shù)加水蒸餾，收集蒸餾液，4℃冷藏，分離油層，得蒼術(shù)揮發(fā)油，備用?？鄥⒓铀逯蠖?，每次2小時，合并煎液，濾過，濃縮至相對密度1.10～1.20（70℃），用75%乙醇沉淀，4℃靜置過夜，濾過，回收乙醇，加水至每1 ml含生藥約1.5 g，用20%氫氧化鈉溶液調(diào)pH值至9~11，用三氯甲烷提取三次，合并三氯甲烷液，濾過，回收溶劑至無三氯甲烷氣味，得浸膏，備用。蒼術(shù)揮發(fā)油加入30 g吐溫-80，攪拌均勻，加30%乙醇200 ml溶解，苦參浸膏加30%乙醇300 ml溶解，以上溶液混合均勻，調(diào)pH值至5.0～7.5，加入苯甲酸鈉2 g，加水至1000 ml，混勻，滅菌，灌裝，即得。
【性狀】 本品為棕黃色液體；氣特異，味辛、苦。
【鑒別】 （1）取本品1 ml，加水9 ml，用正己烷提取三次，每次10 ml，合并正己烷液，揮干，殘渣加正己烷2 ml使溶解，作為供試品溶液。另取蒼術(shù)對照藥材0.5 g，加正己烷2 ml，超聲處理15分鐘，濾過，濾液作為對照藥材溶液。照薄層色譜法（附錄32頁）試驗，吸取上述兩種溶液各2~6 μl， 分別點于同一硅膠G薄層板上，以石油醚（60~90℃）－乙酸乙酯（20︰1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5％ 對二甲氨基苯甲醛的10％硫酸乙醇溶液，加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，應(yīng)顯相同的污綠色主斑點（蒼術(shù)素）。
（2）取本品1 ml，加水9 ml混勻，加濃氨試液調(diào)節(jié)pH至11，用三氯甲烷振搖提取三次，每次10 ml，合并三氯甲烷液，蒸干，殘渣加三氯甲烷10 ml使溶解，作為供試品溶液。另取苦參堿對照品，加三氯甲烷制成每1 ml含0.2 mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法（附錄32頁試驗，吸取上述兩種溶液各2~4 μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以甲苯－丙酮－甲醇(16︰6︰1)為展開劑，置氨蒸氣預(yù)飽和的展開缸內(nèi)，展開，取出，晾干，噴以改良碘化鉍鉀試液。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，應(yīng)顯相同顏色的斑點。
【檢查】pH值  應(yīng)為5.5～7.5（附錄49頁）。
相對密度  應(yīng)為0.90～1.05（附錄45頁）。
三氯甲烷  照溶劑殘留測定法（一部附錄81頁）測定，不得過0.006%。
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗  極性色譜柱，DB-FFAP毛細(xì)管柱（30 m× 0.53 mm，膜厚1 μm）；進(jìn)樣口溫度：220℃；柱溫：程序升溫，40℃保持10分鐘后，以10℃/min的速率升溫至70℃，保持3分鐘，再以20℃/min的速率升溫至200℃；FID檢測器溫度250℃；載氣為氮氣，流速3.0 ml/min；分流比1 : 1；進(jìn)樣方式：直接進(jìn)樣。理論板數(shù)按三氯甲烷峰計算應(yīng)不低于1500。
測定法  精密稱取三氯甲烷對照品適量，用DMF稀釋制成60 μg/ml的溶液，做為對照品溶液。直接取供試品做為供試品溶液。分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各1 μl，注入氣相色譜儀，記錄色譜圖。供試品溶液色譜圖中如有三氯甲烷峰，峰面積不得大于對照溶液主峰面積。
其他  應(yīng)符合合劑項下有關(guān)的各項規(guī)定（附錄10頁）。
【含量測定】 照高效液相色譜法（附錄35頁）測定。
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗  以氨基鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-無水乙醇-3％磷酸溶液（80︰10︰10）為流動相；檢測波長為220 nm。理論板數(shù)按苦參堿峰計算應(yīng)不低于1500。
對照品溶液的制備  精密稱取苦參堿對照品適量，加乙腈-無水乙醇（80︰20）溶解，制成每1 ml含50 μg的溶液，即得。
供試品溶液的制備  精密量取本品5 ml，置50 ml量瓶中，加乙腈-無水乙醇（80︰20）溶解，稀釋至刻度，搖勻，再精密量取5 ml，置50 ml量瓶中，加乙腈-無水乙醇（80︰20）溶解，稀釋至刻度，搖勻，即得。
測定法  分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10 μl，注入液相色譜儀，測定，即得。
本品每1 ml含苦參以苦參堿（C₁₅H₂₄N₂O）計，不得少于4.0 mg。
【功能】 清熱，燥濕，止痢。
【主治】 雞大腸桿菌病。
【用法與用量】 每1 L水，雞，1 ml，連用3～5日。
【規(guī)格】 每1 ml相當(dāng)于原生藥3.66 g。
【貯藏】 密封，避光。
【有效期】 2年
【生產(chǎn)企業(yè)】
 
（二）苦參蒼術(shù)口服液說明書
獸  用
【獸藥名稱】
通用名： 苦參蒼術(shù)口服液
商品名：
漢語拼音：Kushen Cangzhu Koufuye
【主要成分】  蒼術(shù)、苦參。
【性狀】  本品為棕黃色液體；氣特異，味辛、苦。
【功能與主治】  清熱，燥濕，止痢。主治雞大腸桿菌病。
【用法與用量】  每1 L水，雞，1 ml，連用3~5日。
【不良反應(yīng)】  尚未見不良反應(yīng)。
【規(guī)格】  每1 ml相當(dāng)于原生藥3.66 g。
【包裝】 
【貯藏】  密封，避光。
【有效期】 2年。
【生產(chǎn)企業(yè)】
 
（三）苦參蒼術(shù)口服液標(biāo)簽
 
獸  用
【獸藥名稱】
通用名： 苦參蒼術(shù)口服液
商品名：
漢語拼音：Kushen Cangzhu Koufuye
【性狀】  本品為棕黃色液體；氣特異，味辛、苦。
【功能與主治】  清熱，燥濕，止痢。主治雞大腸桿菌病。
【用法與用量】  每1 L水，雞，1 ml，連用3~5日。
【規(guī)格】  每1 ml相當(dāng)于原生藥3.66 g。
【包裝】 
【貯藏】  密封，避光。
【有效期至】 
【生產(chǎn)日期】
【生產(chǎn)企業(yè)】
三、雞新城疫、傳染性支氣管炎、禽流感（H9亞型）三聯(lián)滅活疫苗（La Sota株+M41株+L株）質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、說明書和內(nèi)包裝標(biāo)簽
（一）雞新城疫、傳染性支氣管炎、禽流感（H9亞型）三聯(lián)滅活疫苗（La Sota株+M41株+L株）質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)
 
雞新城疫、傳染性支氣管炎、禽流感（H9亞型）三聯(lián)滅活疫苗（La Sota株+M41株+L株）
Jixinchengyi、Chuanranxingzhiqiguanyan、qinliugan（H9 yaxing）
Sanlianmiehuoyimiao（La Sota zhu+M41 zhu+L zhu)
Newcastle Disease,Infectious Bronchitis and Avain Influenza （Subtype H9） Vaccine,Inactivated（Strain La Sota + Strain M41 +Strain L)
 
本品系用雞新城疫病毒La Sota株、雞傳染性支氣管炎病毒M41株和A型禽流感病毒A/Chicken/Shandong/1/2002（H9N2）株（簡稱L株）分別接種易感雞胚、收獲感染胚液，超濾濃縮后經(jīng)甲醛溶液滅活，與油佐劑混合乳化制成。用于預(yù)防雞新城疫、雞傳染性支氣管炎和H9亞型禽流感病毒引起的禽流感。
【性狀】外觀  乳白色乳劑。
劑型  油包水型。取一清潔吸管，吸取少量疫苗滴入冷水中，除第1滴外，均應(yīng)不擴散。
穩(wěn)定性  吸取疫苗10ml加入離心管中，以3000r/min離心15分鐘，管底析出的水相應(yīng)≤0.5ml。
黏度  按現(xiàn)行《中國獸藥典》附錄進(jìn)行測定，應(yīng)符合規(guī)定。
【裝量檢查】  按現(xiàn)行《中國獸藥典》附錄進(jìn)行檢驗，應(yīng)符合規(guī)定。
【無菌檢驗】  按現(xiàn)行《中國獸藥典》附錄進(jìn)行檢驗，應(yīng)無菌生長。
【安全檢驗】  用30～60日齡SPF雞10只，每只肌肉或頸部皮下注射疫苗1ml，觀察14日，應(yīng)不出現(xiàn)由疫苗引起的任何局部和全身不良反應(yīng)。
【效力檢驗】 
1  雞新城疫部分  采用血清學(xué)方法進(jìn)行檢驗，結(jié)果不符合規(guī)定時，可采用免疫攻毒法進(jìn)行檢驗。
（1）血清學(xué)方法  用30～60日齡SPF雞15只，10只各頸部皮下或肌肉注射疫苗20μl，另5只作對照。接種后21～28日，每只雞分別采血，分離血清，按現(xiàn)行《中國獸藥典》方法進(jìn)行HI抗體效價測定。免疫組HI抗體效價的幾何平均值應(yīng)不低于1:16 ，對照組HI抗體效價均應(yīng)不高于1:4。
（2）免疫攻毒法  用30～60日齡SPF雞15只，10只各皮下或肌肉注射疫苗20μl，另5只作對照。接種后21～28日，每只雞分別肌肉注射雞新城疫病毒北京株強毒（CVCC AV1611株）10^5.0ELD₅₀，觀察14日。對照組應(yīng)全部死亡，免疫組應(yīng)至少保護7只。
2  雞傳染性支氣管炎部分  用14～42日齡SPF雞10只，各點眼、滴鼻接種傳染性支氣管炎活疫苗（H120株）1羽份（0.05ml）。接種后21日，分別采血，分離血清，再肌肉接種三聯(lián)滅活疫苗0.3ml，二免后21～28日再分別采血，分離血清。將兩次血清分別測HI效價（見附注1）。二免血清的HI效價幾何平均值應(yīng)比首免血清HI效價幾何平均值高3倍以上。
3  H9亞型禽流感部分   血清學(xué)方法和免疫攻毒方法，二者任擇其一。
（1）  血清學(xué)方法  用28～35日齡SPF雞15只，10只各皮下或肌肉注射疫苗0.3ml，另5只作對照。接種后21日，每只雞分別采血，分離血清，測定HI抗體效價（見附注2）。免疫組HI抗體效價的幾何平均值應(yīng)不低于1:64，對照組HI抗體效價均應(yīng)不高于1:4。
（2） 免疫攻毒法  將上述免疫雞和對照雞，用1:10稀釋的禽流感病毒（H9亞型）L株進(jìn)行靜脈注射，每只雞0.2ml（約含2×10^6.0EID₅₀）。攻毒后第5日，采集每只雞的泄殖腔拭子，經(jīng)處理后，分別經(jīng)尿囊腔接種9～11日齡SPF雞胚5個，每胚0.2ml，孵育觀察5日，無論死胚、活胚均應(yīng)測定雞胚液血凝價，每個拭子樣品接種的5個雞胚中只要有1個雞胚的雞胚液的血凝價不低于1:16（微量法），即可判為病毒分離陽性。對病毒分離陰性的樣品，應(yīng)盲傳一次后再進(jìn)行判定。免疫組應(yīng)至少有9只雞為病毒分離陰性，對照組應(yīng)至少4只雞病毒分離陽性。
【甲醛和汞類防腐劑殘留量測定】  分別按現(xiàn)行《中國獸藥典》附錄行測定，應(yīng)符合獸用生物制品檢驗的一般規(guī)定。
【規(guī)格】  （1） 100ml／瓶  （2） 250ml／瓶  （3） 500ml／瓶
【貯藏與有效期】  2～8℃保存，有效期為12個月。
 
附注
1  傳染性支氣管炎M41株血凝抑制試驗抗原、陽性血清質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)及血凝抑制試驗操作程序
1.1  雞傳染性支氣管炎血凝抑制試驗抗原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)
本品系用雞傳染性支氣管炎病毒M41株制備的血凝抑制抗原。因目前國內(nèi)無商品化的IB-HI抗原，暫采用國際通用的進(jìn)口IB-HI抗原，所用抗原應(yīng)達(dá)到如下標(biāo)準(zhǔn)：
【性狀】  微黃色疏松團塊，加稀釋液后迅速溶解。
【效價測定】  按標(biāo)識體積稀釋后，對1%雞紅細(xì)胞凝集價應(yīng)不低于1:128。
【特異性】  抗原與傳染性支氣管炎M41株陽性血清呈陽性反應(yīng)（應(yīng)不低于1:256），與陰性血清、禽流感陽性血清、雞新城疫陽性血清、減蛋綜合征陽性血清均為陰性反應(yīng)（應(yīng)不高于1:8）。
【作用與用途】  用于檢測傳染性支氣管炎（Massachusetts血清型）抗體的紅細(xì)胞凝集抑制試驗。
【貯藏與有效期】  2～8℃保存，有效期為120個月。
【規(guī)格】  1ml/瓶
1.2  雞傳染性支氣管炎血凝抑制試驗陽性血清質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)
【性狀】  微黃色或淡紅色疏松團塊，加稀釋液后迅速溶解。
【效價測定】  按標(biāo)識體積稀釋后，HI抗體效價應(yīng)不低于1:256。
【特異性檢驗】  陽性血清與傳染性支氣管炎M41株抗原應(yīng)呈陽性反應(yīng)(應(yīng)不低于1:256)，與禽流感、雞新城疫、減蛋綜合征抗原應(yīng)為陰性反應(yīng)（應(yīng)不高于1:4）。
【作用與用途】  用于傳染性支氣管炎的紅細(xì)胞凝集抑制試驗對照。
【貯藏與有效期】  2～8℃保存，有效期為60個月。
【規(guī)格】  1ml/瓶
1.3  雞傳染性支氣管炎血凝抑制試驗操作方法
1.3.1  雞傳染性支氣管炎HI抗原工作液配制
1.3.1.1  雞傳染性支氣管炎HI抗原血凝價測定  取96孔V型微量反應(yīng)板1塊，每孔加25μl PBS（0.01mol/L，pH值為7.0～7.4），第一排加25μl抗原，并做2～4個重復(fù)孔，然后將抗原進(jìn)行2倍系列稀釋，稀釋后每孔再加入25μl PBS，最后再加入1%雞紅細(xì)胞懸液25μl，用微量振蕩器混勻，2～8℃靜置40分鐘判定結(jié)果，以使紅細(xì)胞100%凝集的抗原最高稀釋倍數(shù)作為判定終點。
1.3.1.2  雞傳染性支氣管炎HI抗原工作液配制（4HA單位抗原的配制）  根據(jù)測定的HI抗原HA效價，用PBS配制4HA單位抗原。將配制好的4HA單位抗原用PBS稀釋，使其稀釋度為1∶2、1∶3、1∶4、1∶5、1∶6、1∶7。在每一稀釋度的25μl抗原中加25μl PBS，再加入1%雞紅細(xì)胞懸液25μl，混勻，2～8℃靜置40分鐘，判定結(jié)果。如果1∶4稀釋為紅
細(xì)胞100%凝集終點，表明配制的是4HA單位抗原；如果紅細(xì)胞100%凝集終點是1∶5或1∶6，表明配制的4HA單位抗原實際上是高于4個單位；如果紅細(xì)胞100%凝集終點是1∶2或1∶3，表明配制的4HA單位抗原實際上是低于4個單位。應(yīng)根據(jù)檢驗結(jié)果適當(dāng)調(diào)整，使抗原工作液為4HA單位。
1.3.2  血凝抑制試驗（HI）
1.3.2.1  取96孔V型微量反應(yīng)板，每孔加25μl PBS。
1.3.2.2  分別吸取25μl待檢血清，加至每塊板的第一排各相應(yīng)孔內(nèi)，并在每塊板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)陽性血清和陰性血清對照，然后作2倍系列稀釋。
1.3.2.3  分別向各孔中加入含4HA單位的抗原25μl，2～8℃靜置60分鐘。
1.3.2.4  每孔中加入1%（V/V）雞紅細(xì)胞懸液25μl，輕輕混勻，2～8℃靜置40分鐘。
1.3.2.5  結(jié)果判定  將反應(yīng)板傾斜，凡血清反應(yīng)孔與紅細(xì)胞對照孔中紅細(xì)胞以同樣速度從孔底流淌者判為血凝抑制。當(dāng)陰性血清HI效價不高于1:8、陽性血清HI效價與規(guī)定效價相比誤差不高于1個滴度時，試驗方可成立。以完全抑制4HA單位抗原的血清最高稀釋度作為HI效價。
2  H9亞型禽流感血凝抑制試驗抗原、陽性血清質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)及血凝抑制試驗操作程序
2.1  H9亞型禽流感血凝抑制試驗抗原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)
【性狀】  微黃色，海綿狀疏松團塊，易與瓶壁脫離，加稀釋液后迅速溶解。
【無菌檢驗】  按現(xiàn)行《中國獸藥典》附錄方法進(jìn)行，應(yīng)無菌生長。
【效價測定】  按標(biāo)識體積稀釋后，對1%雞紅細(xì)胞凝集價應(yīng)不低于1:1024。
【特異性】  抗原與AI(H9)陽性血清為陽性反應(yīng)（HI應(yīng)不低于1:256），與陰性血清、ND陽性血清、禽流感（H5、H7）陽性血清、減蛋綜合征（EDS）陽性血清均為陰性反應(yīng)（HI應(yīng)不高于1:4）。
【敏感性檢驗】  對禽流感陽性血清為陽性反應(yīng)（HI應(yīng)不低于1:256），對SPF雞血清為陰性反應(yīng)（HI應(yīng)不高于1:4）。
【剩余水分測定】  按現(xiàn)行《中國獸藥典》附錄方法進(jìn)行，應(yīng)符合規(guī)定。
【真空度測定】  按現(xiàn)行《中國獸藥典》附錄方法進(jìn)行，應(yīng)符合規(guī)定。
【作用與用途】  用于檢測H9亞型禽流感抗體的紅細(xì)胞凝集抑制試驗。
【貯藏與有效期】  2～8℃保存，有效期為12個月。
【規(guī)格】  （1） 1ml/瓶  （2） 2ml/瓶
2.2  H9亞型禽流感血凝抑制試驗陽性血清質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)
【性狀】  微黃色，海綿狀疏松團塊，易與瓶壁脫離，加稀釋液后迅速溶解。
【無菌檢驗】  按現(xiàn)行《中國獸藥典》附錄方法進(jìn)行檢驗，應(yīng)無菌生長。
【效價測定】  按標(biāo)識體積稀釋后，HI抗體效價應(yīng)不低于1:256。
【特異性檢驗】  陽性血清與AI（H9）抗原應(yīng)呈陽性反應(yīng)（應(yīng)不低于1:256），與EDS、ND、AI（H5、H7）抗原應(yīng)呈陰性反應(yīng)（應(yīng)不高于1:4）。
【剩余水分測定】  按現(xiàn)行《中國獸藥典》附錄方法進(jìn)行，應(yīng)符合規(guī)定。
【真空度測定】  按現(xiàn)行《中國獸藥典》附錄方法進(jìn)行，應(yīng)符合規(guī)定。
【作用與用途】  用于H9亞型禽流感紅細(xì)胞凝集抑制試驗對照。
【貯藏與有效期】  2～8℃保存，有效期為12個月。
【規(guī)格】  （1） 1ml/瓶  （2） 2ml/瓶
2.3  H9亞型禽流感血凝抑制試驗操作方法
2.3.1  H9亞型禽流感HI抗原工作液配制
2.3.1.1  H9亞型禽流感HI抗原血凝價測定  取96孔V型微量反應(yīng)板1塊，每孔加25μl PBS（0.01mol/L，pH值為7.0～7.4），第一排加25μl抗原，并做2～4個重復(fù)孔，然后將抗原進(jìn)行2倍系列稀釋，稀釋后每孔再加入25μl PBS，最后再加入1%雞紅細(xì)胞懸液25μl，用微量振蕩器混勻，室溫（約20℃）靜置20～40分鐘或2～8℃靜置40～60分鐘判定結(jié)果，以使紅細(xì)胞100%凝集的抗原最高稀釋倍數(shù)作為判定終點。
2.3.1.2  H9亞型禽流感HI抗原工作液配制（4HAU抗原的配制）  根據(jù)測定的HI抗原HA效價，用PBS配制4HA單位抗原。將配制好的4HA單位抗原用PBS稀釋，使其稀釋度為1∶2、1∶3、1∶4、1∶5、1∶6、1∶7。在每一稀釋度的25μl抗原中加25μl PBS，再加入1%雞紅細(xì)胞懸液25μl，混勻，2～8℃靜置40分鐘，判定結(jié)果。如果1∶4稀釋為紅細(xì)胞100%凝集終點，表明配制的是4HA單位抗原；如果紅細(xì)胞100%凝集終點是1∶5或1∶6，表明配制的4HA單位抗原實際上是高于4個單位；如果紅細(xì)胞100%凝集終點是1∶2或1∶3，表明配制的4HA單位抗原實際上是低于4個單位。應(yīng)根據(jù)檢驗結(jié)果適當(dāng)調(diào)整，使抗原工作液為4HA單位。
2.3.2  血凝抑制試驗（HI）
2.3.2.1  取96孔V型微量反應(yīng)板，每孔加25μl PBS。
2.3.2.2  分別吸取25μl待檢血清，加至每塊板的第一排各相應(yīng)孔內(nèi)，并在每塊板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)陽性血清和陰性血清對照，然后作2倍系列稀釋。
2.3.2.3  分別向各孔中加入含4HA單位的抗原25μl，室溫（約20℃）靜置40分鐘或2～8℃靜置60分鐘。
2.3.2.4  每孔中加入1%（V/V）雞紅細(xì)胞懸液25μl，輕輕混勻，室溫（約20℃）靜置20～40分鐘或2～8℃靜置40～60分鐘。
2.3.2.5  結(jié)果判定  將反應(yīng)板傾斜，凡血清反應(yīng)孔與紅細(xì)胞對照孔中紅細(xì)胞以同樣速度從孔底流淌者判為血凝抑制。當(dāng)陰性血清HI效價不高于1:4、陽性血清HI效價與規(guī)定效價相比誤差不高于1個滴度時，試驗方可成立。以完全抑制4HA單位抗原的血清最高稀釋度作為HI效價。
 
（二）雞新城疫、傳染性支氣管炎、禽流感（H9亞型）三聯(lián)滅活疫苗（La Sota株+M41株+L株）說明書
 
【獸藥名稱】                                                              獸用
通用名  雞新城疫、傳染性支氣管炎、禽流感（H9亞型）三聯(lián)滅活疫苗（La Sota株+M41株+L株）
商品名  無
    英文名  Newcastle Disease,Infectious Bronchitis and Avain Influenza （Subtype H9 ） Vaccine,Inactivated（Strain La Sota + Strain M41 + Strain L)
漢語拼音  Jixinchengyi、Chuanranxingzhiqiguanyan、qinliugan（H9 yaxing） Sanlianmiehuoyimiao（La Sota zhu+M41 zhu+L zhu)
【主要成分與含量】  疫苗中含有滅活的雞新城疫病毒La Sota株，滅活前的病毒含量≥10^8.5EID₅₀/0.1ml；雞傳染性支氣管炎病毒M41株，滅活前的病毒含量≥10^7.0EID₅₀/0.1ml；禽流感病毒（H9N2亞型）L株，滅活前的病毒含量≥10^7.5EID₅₀/0.1ml。
【性狀】  乳白色乳劑，劑型為油包水型。
【作用與用途】  用于預(yù)防雞新城疫、傳染性支氣管炎和H9亞型禽流感病毒引起的禽流感。接種后21日產(chǎn)生免疫力。
【用法與用量】  肌肉或頸部皮下注射。雛雞，在7～14日齡時首免，每只0.3ml， 21日齡雛雞免疫，每只0.5ml,免疫期為3個月；母雞在開產(chǎn)前14～21日免疫，每只0.5ml，免疫期為6個月。
【不良反應(yīng)】  無。
【注意事項】  （1） 本品用于接種健康雞，體質(zhì)瘦弱、患有其他疾病的雞，禁止使用。
（2） 使用前應(yīng)仔細(xì)檢查 ，如發(fā)現(xiàn)包裝瓶破裂、沒有標(biāo)簽、疫苗中混有雜質(zhì)、疫苗油相和水相嚴(yán)重分層等情況，均不能使用。
（3） 使用前，應(yīng)先使疫苗恢復(fù)到常溫，并充分搖勻。
（4） 疫苗包裝啟封后要防止污染，限2小時內(nèi)用完。
（5） 本品不能凍結(jié)。
（6） 注射本品用的針頭、注射器等用具，用前需經(jīng)高壓或煮沸消毒 。
（7） 本品應(yīng)與雞新城疫、傳染性支氣管炎活疫苗結(jié)合使用，以提高細(xì)胞免疫與粘膜免疫。
【規(guī)格】  （1）100ml/瓶  （2）250ml/瓶  （3）500ml/瓶
【包裝】  （1）120瓶/箱  （2）40瓶/箱  （3）20瓶/箱
【貯藏與有效期】  2～8℃下保存，有效期為12個月。
【生產(chǎn)企業(yè)】
僅在獸醫(yī)指導(dǎo)下使用
 
（三）雞新城疫、傳染性支氣管炎、禽流感（H9亞型）三聯(lián)滅活疫苗（La Sota株+M41株+L株）內(nèi)包裝標(biāo)簽
 
                                                                                 獸用
雞新城疫、傳染性支氣管炎、禽流感（H9亞型）三聯(lián)滅活疫苗
（La Sota株+M41株+L株）
 
100（250、500）ml/瓶                               生產(chǎn)日期：
生產(chǎn)批號：
有效期至：
 
【作用與用途】  用于預(yù)防雞新城疫、傳染性支氣管炎和H9亞型禽流感病毒引起的禽流感。接種后21日產(chǎn)生免疫力。
【用法與用量】  肌肉或頸部皮下注射。雛雞，在7～14日齡時首免，每只0.3ml， 21日齡雛雞免疫，每只0.5ml,免疫期為3個月；母雞在開產(chǎn)前14～21日免疫，每只0.5ml，免疫期為6個月。
【貯藏與有效期】  2～8℃保存，有效期為12個月。
【批準(zhǔn)文號】 
【生產(chǎn)企業(yè)】 
僅在獸醫(yī)指導(dǎo)下使用