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近日，國際學術期刊Microbiology Spectrum在線發(fā)表了華中農業(yè)大學動科動醫(yī)學院何啟蓋教授團隊題為“TurboID Screening of the OmpP2 Protein Reveals Host Proteins Involved in Recognition and Phagocytosis of Glaesserella parasuisby iPAM Cells”的研究論文。該研究通過TurboID鄰近標記技術，揭示了豬格拉瑟氏菌OmpP2蛋白與宿主細胞的互作蛋白質組，并通過過表達和siRNA干擾技術證實宿主細胞膜蛋白CAV1、ARF6和PPP2R1A參與iPAM細胞對豬格拉瑟氏菌的識別與吞噬。該研究從宿主的角度揭示了豬格拉瑟氏菌入侵宿主細胞的關鍵蛋白，進一步闡明了豬格拉瑟病的致病機理，為治療和防控提供了新的思路。豬格拉瑟氏菌是定植于豬上呼吸道的一種常在菌，但在特定的條件下，例如豬群應激、免疫力低下或者伴隨其他病原混合感染時，該菌可以侵入機體各系統(tǒng)組織，引起以纖維素性多發(fā)性漿膜炎、關節(jié)炎和腦膜炎為臨床特征的革拉瑟氏病。何啟蓋教授團隊多年來一直專注于豬格拉瑟氏菌的致病機制研究。TurboID為生物素連接酶，其在游離生物素存在的條件下，可將10nm范圍內的蛋白質進行生物素標記，之后通過鏈霉素親和磁珠對生物素化的蛋白進行捕獲及進行質譜鑒定，可得到與目標蛋白互作的蛋白質組。本研究通過將豬格拉瑟氏菌外膜蛋白OmpP2與TurboID融合表達，并將重組蛋白與iPAM細胞互作，共鑒定到240個與OmpP2互作的宿主蛋白，其中包含四個膜蛋白（CAV1、ARF6、PPP2R1A和AP2M1）。利用過表達和siRNA干擾技術證明CAV1、ARF6和PPP2R1A參與iPAM細胞對豬格拉瑟氏菌的識別和吞噬。本研究表明，TurboID鄰近標記技術是研究病原菌與宿主蛋白互作的有力工具。
圖1. TurboID鄰近標記技術示意圖
圖2.質譜鑒定結果
華中農業(yè)大學動科動醫(yī)學院博士生江昌盛為論文第一作者，李文濤教授和何啟蓋教授為論文通訊作者。該研究得到了財政部和農業(yè)農村部：國家現(xiàn)代農業(yè)產業(yè)技術體系資助（CARS-35）的資助。https://journals.asm.org/doi/full/10.1128/spectrum.02307-22
編輯：周盼伊
審核：劉業(yè)兵
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